BSC-1000ⅡB2 生物安全柜 《使用章程及日常維護(hù)》

生物安全柜原理

生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實驗材料時，用來保護(hù)操作者本人、實驗室環(huán)境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計的。當(dāng)操作液體或半流體，例如搖動、傾注、攪拌，或?qū)⒁后w滴加到固體表面上或另一種液體中時，均有可能產(chǎn)生氣溶膠。在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細(xì)胞培養(yǎng)瓶、采用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉(zhuǎn)移到微量培養(yǎng)板中、對感染性物質(zhì)進(jìn)行勻漿及渦旋振蕩、對感染性液體進(jìn)行離心以及進(jìn)行動物操作時，這些實驗室操作都可能產(chǎn)生感染性氣溶膠。由于肉眼無法看到直徑小于5μm的氣溶膠以及直徑為5～100μm的微小液滴，因此實驗室工作人員通常意識不到有這樣大小的顆粒在生成，并可能吸入或交叉污染工作臺面的其他材料。已經(jīng)表明，正確使用生物安全柜可以有效減少由于氣溶膠暴露所造成的實驗室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。生物安全柜同時也能保護(hù)環(huán)境。

多年以來，生物安全柜的基本設(shè)計已經(jīng)歷了多次改進(jìn)。主要的變化是在排風(fēng)系統(tǒng)增加了HEPA過濾器。對于直徑0．3μm的顆粒，HEPA過濾器可以截留99．97%，而對于更大或更小的顆粒則可以截留99．99%。HEPA過濾器的這種特性使得它能夠有效地截留所有已知傳染因子，并確保從安全柜中排出的是*不含微生物的空氣。生物安全柜設(shè)計中的第二個改進(jìn)是將經(jīng)HEPA過濾的空氣輸送到工作臺面上，從而保護(hù)工作臺面上的物品不受污染。這一特點通常被稱為實驗對象保護(hù)（product protection）。這些基本設(shè)計上的變化使得生物安全柜都得到了改進(jìn)。

生物安全柜的操作規(guī)程

1、 向所有可能使用生物安全柜的用戶解釋安全柜的使用及限制條件。應(yīng)發(fā)給工作人員操作手冊。特別是必須明確告訴工作人員，在出現(xiàn)濺灑、破碎、方法不當(dāng)?shù)那闆r下，安全柜無法保護(hù)操作人員。

2、 安全柜只有在工作正常時才能使用。

3、 安全柜前臉的玻璃觀察窗不得在安全柜處使用狀態(tài)時打開。

4、 柜內(nèi)放置的儀器和材料必須保持在**低數(shù)量。靜壓箱后部的空氣循環(huán)不得受阻。將材料放入安全柜的工作區(qū)之前，應(yīng)對其表面進(jìn)行去污處理。

5、 柜內(nèi)不得使用本生燈（一種煤氣燈），因其產(chǎn)生的熱會干擾氣流并可能損壞過濾器。可以使用微型電焚燒爐，但使用一次性滅菌環(huán)則更好。

6、 柜內(nèi)所有的工作要在工作面的中部或后部進(jìn)行，并能從觀察面板中看到。

7、 操作手后方的活動要達(dá)到**少。

8、 操作手不應(yīng)將手臂來回伸進(jìn)出柜子，以免干擾氣流。

9、 前送風(fēng)格柵不得被便簽、滴管、或其他材料堵住，否則會干擾氣流從而可能使材料受到污染，使人員處在暴露狀態(tài)。

10、應(yīng)在每次工作完成后及**結(jié)束時，使用合適的消毒劑清潔安全柜的表面

11、柜子的風(fēng)扇在工作開始前和工作完成后要再各運行5分鐘。

生物安全柜的清潔與消毒

生物安全柜內(nèi)的所有物品，包括設(shè)備，都應(yīng)在工作完成之后進(jìn)行表面去污處理并從柜內(nèi)取出，因為殘留的培養(yǎng)介質(zhì)可能會提供微生物的生長條件。安全柜的內(nèi)表面應(yīng)在每次使用前與使用后進(jìn)行去污處理。要用消毒劑擦拭工作臺表面及內(nèi)壁面，使用的消毒劑應(yīng)能殺死柜內(nèi)可能存在的所有微生物。**工作結(jié)束時，應(yīng)進(jìn)行**后表面去污處理，即對工作臺、各個側(cè)面、背面及玻璃的里面進(jìn)行全面擦拭。可以使用漂白粉液或70%酒精，這種對目標(biāo)生物有效的消毒劑。如使用漂白粉液這種有腐蝕性的消毒劑，則要用滅菌水進(jìn)行二次擦拭。建議工作柜在清潔、消毒時處在工作狀態(tài)。如果其未處在工作狀態(tài)，則應(yīng)運行5分鐘，以便在安全柜關(guān)閉前將其中的氣體清除掉。

生物安全柜的去污處理

對II級生物安全柜的去污，是將適量的低聚甲醛（使柜內(nèi)空氣中的低聚甲醛的**終濃度為80%）置于電熱盤或煎鍋上（從柜外控制）。另將一個放有比低聚甲醛多10%的碳酸氫的電熱盤或煎鍋也放在柜內(nèi)（在柜外控制）。這第二個容器上應(yīng)帶蓋，這個蓋子可以從遠(yuǎn)處取下來（例如系在一根線上，線可以從柜外拉動）。這樣可以使提前中和的低聚甲醛達(dá)到**小。如果相對溫度低于70%，有熱水的開口容器。如果沒有前隔板，則要用生型塑料擋板，將其用膠帶粘在前臉，確保不會有氣體漏入房間。當(dāng)盤內(nèi)的低聚甲醛已全部揮發(fā)或開關(guān)已打開1小時后，將開關(guān)關(guān)閉。將安全柜放置一整晚不得觸動。然后將第二個盤子的蓋移開并打開其開關(guān)，碳酸氫氨開始揮發(fā)。這時，關(guān)閉盤子的開關(guān)，讓安全柜開始工作，使碳酸氫氨氣循環(huán)1小時。然后可以取下前隔板（或塑料擋板），安全柜即可使用。

操作者

生物安全柜如果使用不當(dāng)，其防護(hù)作用就可能大大受到影響。操作者在移動雙臂進(jìn)出安全柜時，需要小心維持前面開口處氣流的完整性，雙臂應(yīng)該垂直地緩慢進(jìn)出前面的開口。手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢并且讓里面的空氣“掃過”手和雙臂的表面以后，才可以開始對物品進(jìn)行處理。要在開始實驗之前將所有必需的物品置于安全柜內(nèi)，以盡可能減少雙臂進(jìn)出前面開口的次數(shù)。#p#分頁標(biāo)題#e#

物品放置

Ⅱ級生物安全柜前面的進(jìn)氣格柵不能被紙、儀器設(shè)備或其他物品阻擋。放入安全柜內(nèi)的物品應(yīng)采用70%酒精來清除表面污染?？梢栽谙緞┙竦拿砩线M(jìn)行實驗，以吸收可能濺出的液滴。所有物品應(yīng)盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺后緣的位置，并使其在操作中不會阻擋后部格柵?？僧a(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備（例如混勻器、離心機(jī)等）應(yīng)靠近安全柜的后部放置。像有生物危害性的廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品，應(yīng)該放在安全柜內(nèi)的某一側(cè)。在工作臺面上的實驗操作應(yīng)該按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進(jìn)行。

耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤不應(yīng)放在安全柜的外面，否則在使用這些物品時雙臂就必須頻繁進(jìn)出安全柜，這樣會干擾安全柜空氣屏障的完整性，從而影響對人員和物品的防護(hù)。

明火

在生物安全柜內(nèi)所形成的幾乎沒有微生物的環(huán)境中，應(yīng)避免使用明火。使用明火會對氣流產(chǎn)生影響，并且在處理揮發(fā)性物品和易燃物品時，也易造成危險。在對接種環(huán)進(jìn)行滅菌時，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應(yīng)使用明火。

溢出

實驗室中要張貼如何處理溢出物的實驗室操作規(guī)則，每一位使用實驗室的成員都要閱讀并理解這些規(guī)程。一旦在生物安全柜中發(fā)生有生物學(xué)危害的物品溢出時，應(yīng)在安全柜處于工作狀態(tài)下立即進(jìn)行清理。要使用有效的消毒劑，并在處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢出物品的材料都要進(jìn)行消毒和／或高壓滅菌。

個體防護(hù)裝備

在使用生物安全柜時應(yīng)穿著個體防護(hù)服。在進(jìn)行一級和生物安全水平的操作時，可穿著普通實驗服。前面加固處理的反背式實驗隔離衣具有更好的防護(hù)效果，應(yīng)在進(jìn)行三級和四級生物安全水平（防護(hù)服型實驗室除外）的操作時使用。手套應(yīng)套在隔離衣的外面，可以戴加有松緊帶的套袖來保護(hù)研究人員的手腕。有些操作可能還需要戴口罩和安全眼鏡。

常見故障

窗式警報器只能裝在帶有滑動窗的安全柜上。發(fā)出警報時表明操作者將滑動窗移到了不當(dāng)?shù)奈恢?。處理這種警報時，只要將滑動窗移到適宜的位置就可以了。氣流警報器報警時，表明安全柜的正常氣流模式受到了干擾，操作者或物品當(dāng)即處于危險狀態(tài)。當(dāng)氣流警報響起時，應(yīng)立刻停止工作。

易損件

   生物安全柜主要及重要的消耗品為排風(fēng)HEPA過濾器、送風(fēng)HEPA過濾器。